贵州省盘县淤泥乡畜牧兽医站     553523

    山羊传染性脓疱病俗称羊口疮，是由羊传染性脓疱病毒引起的绵羊、山羊的一种急性、接触传染性、嗜上皮性传染病。羊传染性脓疱病病毒为痘病毒科副痘病毒属成员。羔羊最为敏感，另外鹿、牛、人也可感染，是一种人畜共患病。其临床症状主要表现为在绵羊、山羊的唇部、口腔黏膜、鼻部和乳房等部位的皮肤形成脓疱、丘疹、水泡和疣状痂皮，引起粘膜和皮肤的增生性变化。该病传染性极强，现呈流行趋势，在全世界养羊国家均有分布，给养羊业造成巨大的经济损失。主要症状为典型的口疮型症状，现将具体的诊断与防治报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 病料处理

　　采集患病羔羊唇部的痂皮材料于玛瑙研钵中，加0.01mol/L（pH7.2）PBS研磨成悬液，1000r/min离心20min，取上清，按20%比例加入浓度为10000 IU/ml的双抗（青、链霉素），4℃感作过夜后，-20℃保存备用，留作病毒接种液。

　　1.2 犊牛睾丸细胞的培养

　　无菌采取1日龄犊牛睾丸，用D-Hank′s液清洗2-3次；先将睾丸组织剪碎，再加入4-5倍体积的0.25%胰酶液进行消化，置于37℃水浴锅中消化30min，期间每隔10min振荡1次，然后加入血清终止消化；3000r/min离心10min，弃上清，再加入10%MEM冲洗，用4层无菌纱布过滤收集细胞悬液；最后按10%比例加入血清，置于37℃CO2培养箱培养。

　　1.3 病毒的分离培养

　　待犊牛睾丸细胞长满单层后，接种处理过的病毒液1ml，37℃吸附1h，弃上清后加入2%MEM，37℃培养，同时设正常细胞对照，每天观察细胞生长情况和细胞病变（CPE）。待细胞出现明显病变后，将出现病变的细胞病毒液反复冻融3次后收毒，置-20℃保存。

　　1.4 病毒粒子的电镜观察

　　将病毒细胞培养液反复冻融3次，3000r/min离心20min，取沉淀物进行电镜观察。

　　1.5 引物设计与合成

　　根据GeneBank上的基因序列设计一对引物[3]：

　　上游引物：GAAGAACTCGCCCGCCTGCTAAAAG

　　下游引物：ATGTGGCCGTTCTCCTCCAT

　　预计合成片段长度为1137 bp。

　　1.6 PCR扩增

　　以本次试验分离的羊传染性脓疱病毒基因组DNA为模板，进行PCR扩增。反应条件为94℃预变性3min，1个循环；然后进入98℃变性10s，55℃退火30s，72℃延伸2min共30个循环；最后72℃延伸10min，4℃保存。

　　2 结果

　　2.1 细胞病变观察

　　长势良好的犊牛睾丸细胞接种羊传染性脓疱病毒液后，在18-24h开始肿胀、变圆；在变圆、肿胀后2-3h内细胞间质逐渐增宽，细胞开始分散并团缩，出现拉网，呈葡萄串状。随着病毒传代，细胞病变越来越明显和有规律性。

　　2.2 病毒粒子的电镜观察结果

　　提取病毒细胞培养液离心沉淀物，电镜观察。在负染标本中，病毒粒子呈椭圆型的线团样，病毒粒子长220nm,宽152nm，为典型的副痘病毒形状。

　　2.3 PCR结果

羊传染性脓疱病毒经PCR扩增后，在凝胶电泳后出现1条约1137bp的条带，与预期引物设计时的目的片段大小相等。

3 治疗方法

及时隔离病羊，做好环境的消毒，减少羊群密度。羊舍内外环境、饲养管理用具用0.05%过氧乙酸或0.1%消毒威彻底消毒1次；然后对隔离羊舍每天消毒1次。

　　

　　3.1揭去痂皮，用温盐水或0.1%～0.2%高锰酸钾液清洗疮口，然后涂布碘甘油、紫药水、鱼石脂软膏或尿素软膏。同时羊内服或肌肉注射10%病毒灵2～5毫升，每天2次，连用3～5天为一疗程。

　　3.2用0.1%～0.2%高锰酸钾液冲洗创面后，取枯矾、冰片、南丹、陈石灰、煅石膏、雄黄各等份，与半份量朱砂共为细末，撒敷。每天1～2次。或灌服中药消黄散20～40克，引蜂蜜30～50克、鸡蛋清1～2个。

　　3.3黄连上清丸，每千克体重服1克，每天2次。

　　3.4揭去痂皮后，用适量百草霜撒敷，每天1～2次，连用3～5天为1疗程。有继发感染的，可用抗生素、磺胺、解热药、维生素等进行对症治疗。治疗中对病情严重、不能进食的羔羊要人工喂奶、补液；喂给优质牧草与全价饲料。 

 

　　4 防治措施

　　4.1不要从疫区引进羊及其相关畜产品

如果引进外地羊，需先隔离观察3周，严格检疫、消毒，证明无病后方可混群饲养。一旦本地羊患病，对本群患病羊只应采取隔离措施，对接触过的用具，采取消毒处理，以防止疫情扩散。不要从疫区引进山羊。在山羊传染性脓疱病发病期引进新羊时必须隔离观察2个月，经检验健康者才与其他羊混合饲养。

　　4.2加强饲养管理，喂给优质牧草与全价饲料，保证母羊膘情好、奶水足，羔羊身体强壮。产房与育羔舍饲养密度适中，温暖，干燥，阳光充足，通风良好，冬春寒冷季节勤换垫草。

　　4.3防止羔羊口腔等处的皮肤和黏膜出现创伤是减少本病发生的有效措施。因此，应给羔羊提供柔软的垫草和粉细的草料，尽可能挑出带芒刺或尖硬的饲草与垫草。

　　4.4免疫接种，在本病常发地区，可用羊口疮弱毒苗对7日龄以内的羔羊进行股内侧皮肤划痕接种，10天后产生免疫力，免疫期为一年，可有效地防止山羊传染性脓疱病的发生。

　　5 讨论

　　（1）在羊传染性脓疱病毒病毒培养的过程中，该病毒在犊牛睾丸细胞上产生的CPE与相关研究的报道相同。随着病毒在犊牛睾丸细胞上的传代，细胞病变越来越明显并具有规律性。但在电镜观察时，在羊传染性脓疱病毒细胞培养液3000r/min离心后的上清液中很难看到病毒粒子的存在，而在其沉淀物中则可发现大量的病毒粒子。

　　（2）目前羊接触传染性脓疱病在吉林省羊群中的发病率较高，尤其是在产羔期和哺乳期，极易造成本病的大面积暴发流行，此次我们分离到吉林地方毒株，对控制和预防该病在我省的流行有重大意义。

　　（3）对于本病的防治重点为做好预防和保持良好的饲养环境。对于外源引进羊只做好检疫；加强本地羊只的防疫工作；降低饲养环境诱发本病的外因，就可极大的降低本病的发生概率，减少羊场的经济损失。